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病毒的包裝是什么意思它的原理及經(jīng)驗

發(fā)布日期:2020-06-24 15:37

病毒的包裝是什么意思它的原理及經(jīng)驗

病毒的包裝

慢病毒(Lentivirus)的包裝是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒,它可以將靶基因引入一些難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中,例如原代細(xì)胞等。 靶基因隨機(jī)整合到宿主基因組中,大大提高了轉(zhuǎn)染效率,可以在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)數(shù)代,可以篩選出穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。 由于隨機(jī)積分,還存在不確定因素。 一些公司還可以提供靶向整合技術(shù),將靶向基因整合到基因組的特定部分,以確保其病毒的包裝表達(dá)且不會因隨機(jī)整合而對細(xì)胞造成傷害。  

慢病毒表達(dá)載體包含包裝,轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定整合所需的遺傳信息。 慢病毒包裝質(zhì)??梢蕴峁┺D(zhuǎn)錄和包裝RNA到重組假病毒載體中所需的所有輔助蛋白。 為了產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,有必要用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒將細(xì)胞共轉(zhuǎn)染,將病毒包裝在細(xì)胞中,將包裝的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外培養(yǎng)基中,將上清液通過離心獲得,然后可以直接用于宿主細(xì)胞感染。  

慢病毒載體基因組是一種正鏈RNA。 基因組進(jìn)入細(xì)胞后,通過自身的逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成細(xì)胞質(zhì)中的DNA,形成DNA整合前復(fù)合體。 進(jìn)入細(xì)胞核后,DNA整合到細(xì)胞基因組中。 整合的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA,并將其返回細(xì)胞質(zhì),表達(dá)目的蛋白或產(chǎn)生RNAi干擾。 慢病毒的包裝系統(tǒng)由包裝質(zhì)?;旌衔铮?/span>Mix)和慢病毒載體質(zhì)粒組成。  

通過胰蛋白酶消化收集細(xì)胞,將細(xì)胞在35mm培養(yǎng)皿中用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基壓平(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細(xì)胞占據(jù)的面積附著在80%的培養(yǎng)皿上)。 培養(yǎng)皿的總面積%以上)。 將細(xì)胞在含有5%CO2的37°C培養(yǎng)箱中孵育8-24小時。 當(dāng)細(xì)胞完全粘附于細(xì)胞后,即可開始轉(zhuǎn)染。 轉(zhuǎn)染前2h病毒的包裝更換培養(yǎng)基(將舊培養(yǎng)基替換為1.5ml完全培養(yǎng)基)。  

在我們的實驗室中,我們包裝了VSV-GPF病毒。 首先,將BHK21細(xì)胞分散在6孔板中。 達(dá)到90%的豐度后,將它們感染痘病毒,提供T7RNA聚合酶,然后用prVSV-GFP主鏈質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。 表達(dá)4種結(jié)構(gòu)蛋白的pBS-NpBS-P,pBS-G,pBS-L輔助質(zhì)粒。  48小時后,收集上清液,再次感染健康細(xì)胞后可見GFP表達(dá)。 請諸神,輔助質(zhì)粒的目的是什么? 由于prVSV-GFP骨架質(zhì)粒帶有N,P,G和L的四個結(jié)構(gòu)基因,因此尚不為人所知,但是如果沒有輔助質(zhì)粒則無法包裝病毒。

有遺傳物質(zhì)有外殼蛋白,可以引導(dǎo)兩者進(jìn)入病毒。 腺病毒只能在293A中擴(kuò)增,而不能在其他細(xì)胞中擴(kuò)增。 慢病毒載體大多被HIV修飾,可以復(fù)制野生型慢病毒的包裝載體,但只能在實驗室中使用。 使其具有復(fù)制缺陷。 簡而言之,它是替換或刪除與相應(yīng)功能有關(guān)的相應(yīng)元素。  

病毒在細(xì)胞中進(jìn)行基因組復(fù)制和蛋白質(zhì)表達(dá),然后自行組裝。 微觀世界中的病毒顆粒很奇怪,并且具有不同的結(jié)構(gòu)。 每種類型的病毒都有其自己的特殊組裝方法。 然而,受科學(xué)技術(shù)水平的限制,病毒裝配領(lǐng)域的研究工作相對不受歡迎。 如果要實時動態(tài)觀察病毒組裝,仍然很難實現(xiàn)。 因此,許多有關(guān)病毒的包裝研究仍幾乎是空白。 即使有研究,或者可以確定整個病毒組裝過程,我個人認(rèn)為可能只有5分之5。  

分段病毒的包裝,例如流感病毒,布尼亞病毒和虎腸病毒。 這些病毒的基因組是分段的。 如何確保在病毒包裝過程中可以將每個基因組包裝到病毒顆粒中。 以具有三段基因組的布尼亞病毒為例,如果只包裝基因組的兩個片段,會形成病毒顆粒嗎? 但是可以肯定的是,即使可以形成顆粒,病毒仍具有復(fù)制缺陷。  

另一個有趣的現(xiàn)象是“空心包裝”(我自己的名字)現(xiàn)象。 兩天前,我讀了一篇有關(guān)塞內(nèi)卡病毒結(jié)構(gòu)生物學(xué)的論文。 塞內(nèi)卡病毒的包裝屬于小RNA病毒家族,很像口蹄疫病毒。 該論文的作者提到,他們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中10%的病毒不包含基因組,即所謂的病毒樣顆粒(VLP),或者當(dāng)包裝病毒時,基因組沒有被封閉,它們被 直接形成的。 完整的蛋白質(zhì)外殼。 作者在文章中說,這個“空心包裝”現(xiàn)在大象的機(jī)制尚不清楚。 讓我用一個易于理解的詞來概括它:盡管該病毒的包裝看起來很嚴(yán)密有序,但有時還是會漏掉。  

 

 

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