發(fā)布日期：2020-06-24 15:37
病毒的包裝是什么意思它的原理及經(jīng)驗
病毒的包裝
慢病毒（Lentivirus）的包裝是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，它可以將靶基因引入一些難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，例如原代細(xì)胞等。 靶基因隨機(jī)整合到宿主基因組中，大大提高了轉(zhuǎn)染效率，可以在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)數(shù)代，可以篩選出穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。 由于隨機(jī)積分，還存在不確定因素。 一些公司還可以提供靶向整合技術(shù)，將靶向基因整合到基因組的特定部分，以確保其病毒的包裝的表達(dá)且不會因隨機(jī)整合而對細(xì)胞造成傷害。
慢病毒表達(dá)載體包含包裝，轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定整合所需的遺傳信息。 慢病毒包裝質(zhì)?？梢蕴峁┺D(zhuǎn)錄和包裝RNA到重組假病毒載體中所需的所有輔助蛋白。 為了產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，有必要用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒將細(xì)胞共轉(zhuǎn)染，將病毒包裝在細(xì)胞中，將包裝的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外培養(yǎng)基中，將上清液通過離心獲得，然后可以直接用于宿主細(xì)胞感染。
慢病毒載體基因組是一種正鏈RNA。 基因組進(jìn)入細(xì)胞后，通過自身的逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成細(xì)胞質(zhì)中的DNA，形成DNA整合前復(fù)合體。 進(jìn)入細(xì)胞核后，DNA整合到細(xì)胞基因組中。 整合的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA，并將其返回細(xì)胞質(zhì)，表達(dá)目的蛋白或產(chǎn)生RNAi干擾。 慢病毒的包裝系統(tǒng)由包裝質(zhì)?；旌衔铮?/span>Mix）和慢病毒載體質(zhì)粒組成。
通過胰蛋白酶消化收集細(xì)胞，將細(xì)胞在35mm培養(yǎng)皿中用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基壓平（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞占據(jù)的面積附著在80％的培養(yǎng)皿上）。 培養(yǎng)皿的總面積％以上）。 將細(xì)胞在含有5％CO2的37°C培養(yǎng)箱中孵育8-24小時。 當(dāng)細(xì)胞完全粘附于細(xì)胞后，即可開始轉(zhuǎn)染。 轉(zhuǎn)染前2h病毒的包裝更換培養(yǎng)基（將舊培養(yǎng)基替換為1.5ml完全培養(yǎng)基）。
在我們的實驗室中，我們包裝了VSV-GPF病毒。 首先，將BHK21細(xì)胞分散在6孔板中。 達(dá)到90％的豐度后，將它們感染痘病毒，提供T7RNA聚合酶，然后用prVSV-GFP主鏈質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。 表達(dá)4種結(jié)構(gòu)蛋白的pBS-NpBS-P，pBS-G，pBS-L輔助質(zhì)粒。 48小時后，收集上清液，再次感染健康細(xì)胞后可見GFP表達(dá)。 請諸神，輔助質(zhì)粒的目的是什么？ 由于prVSV-GFP骨架質(zhì)粒帶有N，P，G和L的四個結(jié)構(gòu)基因，因此尚不為人所知，但是如果沒有輔助質(zhì)粒則無法包裝病毒。
有遺傳物質(zhì)有外殼蛋白，可以引導(dǎo)兩者進(jìn)入病毒。 腺病毒只能在293A中擴(kuò)增，而不能在其他細(xì)胞中擴(kuò)增。 慢病毒載體大多被HIV修飾，可以復(fù)制野生型慢病毒的包裝載體，但只能在實驗室中使用。 使其具有復(fù)制缺陷。 簡而言之，它是替換或刪除與相應(yīng)功能有關(guān)的相應(yīng)元素。
病毒在細(xì)胞中進(jìn)行基因組復(fù)制和蛋白質(zhì)表達(dá)，然后自行組裝。 微觀世界中的病毒顆粒很奇怪，并且具有不同的結(jié)構(gòu)。 每種類型的病毒都有其自己的特殊組裝方法。 然而，受科學(xué)技術(shù)水平的限制，病毒裝配領(lǐng)域的研究工作相對不受歡迎。 如果要實時動態(tài)觀察病毒組裝，仍然很難實現(xiàn)。 因此，許多有關(guān)病毒的包裝研究仍幾乎是空白。 即使有研究，或者可以確定整個病毒組裝過程，我個人認(rèn)為可能只有5分之5。
分段病毒的包裝，例如流感病毒，布尼亞病毒和虎腸病毒。 這些病毒的基因組是分段的。 如何確保在病毒包裝過程中可以將每個基因組包裝到病毒顆粒中。 以具有三段基因組的布尼亞病毒為例，如果只包裝基因組的兩個片段，會形成病毒顆粒嗎？ 但是可以肯定的是，即使可以形成顆粒，病毒仍具有復(fù)制缺陷。
另一個有趣的現(xiàn)象是“空心包裝”（我自己的名字）現(xiàn)象。 兩天前，我讀了一篇有關(guān)塞內(nèi)卡病毒結(jié)構(gòu)生物學(xué)的論文。 塞內(nèi)卡病毒的包裝屬于小RNA病毒家族，很像口蹄疫病毒。 該論文的作者提到，他們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中10％的病毒不包含基因組，即所謂的病毒樣顆粒（VLP），或者當(dāng)包裝病毒時，基因組沒有被封閉，它們被 直接形成的。 完整的蛋白質(zhì)外殼。 作者在文章中說，這個“空心包裝”現(xiàn)在大象的機(jī)制尚不清楚。 讓我用一個易于理解的詞來概括它：盡管該病毒的包裝看起來很嚴(yán)密有序，但有時還是會漏掉。
